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【材料簡介】

甲基丙烯?；髂z（Gelatin Methacryloyl, GelMA）為烯烴雙鍵改性明膠，其可通過紫外及可見光在光引發劑作用下迅速固化成膠。GelMA 光固化水凝膠兼具天然和合成生物材料的特征，其具有適于細胞生長和分化的三維（3D）結構。GelMA 水凝膠具有優異的生物相容性和細胞反應特性，例如提供合適的細胞粘附位點及蛋白水解降解性，其可以取代人工基底膜或其他天然膠原蛋白水凝膠。此外，GelMA 水凝膠具有良好的機械性能，其構建的 3D 微支架具有可調的機械和化學性質。

【型號規格】

【產品應用】

細胞培養、生物 3D 打印、組織工程等。

【儲存條件】

干態套裝：室溫，3個月；4℃，12個月；-20℃，18個月。

【核磁氫譜】

GelMA合成反應原理及GM30/60/90核磁氫譜

【黏度】流變測試：黏度（剪切速率：10rad/s，37℃）

【溫敏行為】流變測試：降/升溫相轉變溫度及5℃凍膠強度（振蕩溫度掃描：40 ℃→4 ℃→40 ℃，5 ℃/min，應變1%，角速率5rad/s）

【儲能模量】流變測試：光固化過程及最終凝膠儲能模量（振蕩時間掃描：應變1%，角速率5rad/s；輻照光源：405nm，30mW/cm2，30s）

【壓縮模量】 三種型號不同濃度的GelMA壓縮模量：EFL-LS-1601-405光源固化30s

【生物相容性】GelMA已廣泛用于干細胞、癌細胞、內皮細胞、神經細胞等各類細胞的2D/3D培養，細胞存活率大于90%，細胞功能化良好

骨髓間充質干細胞（BMSC）在GelMA表面及內部培養效果

3D打印GelMA支架的生物相容性表征

建議?GelMA 濃度為 5-30 % (w/v)。具體使用步驟，詳見說明書及操做指南?

【產品說明書】甲基丙烯?；髂z EFL-GM系列

·使用指南：GelMA水凝膠表面細胞培養（2D培養）

·使用指南：GelMA水凝膠內部細胞培養（3D培養）

·使用指南：GelMA水凝膠溶液制備

【答疑】GelMA水凝膠使用常見問題

甲基丙烯?；髂z（GelMA）由于具有生物兼容性好、可見光固化的特點，已廣泛應用于細胞3D培養、組織工程、生物3D打印等研究領域。EFL團隊研制的GelMA產品具有批次穩定、服務專業等優點，深受國內外科研工作者的好評與認可。為了幫助用戶更好的使用EFL-GM系列水凝膠產品，EFL團隊現整理GelMA使用相關的高頻問題如下，可供參考。

Q1：1g GelMA材料可以配多少溶液？

答：EFL推薦使用的工作液濃度范圍為5%-30%（w/v），1g可以配3.3-20mL工作溶液；用戶常用濃度范圍為5%-10%（w/v），1g可以配10-20mL工作溶液；附贈LAP送引發劑，無需再單獨購買。

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Q2：GelMA的取代度有哪些型號？在GelMA表面接種細胞和把細胞混到GelMA里做三維培養，分別應該選什么型號的GelMA？要是做3D打印，又應該選什么型號呢？

答：①EFL目前有氨基取代度為30%、60%和90%三種常用固定型號的GelMA，均有現貨。GM30、GM60和GM90均可應用于細胞培養，同等條件下，取代度越高，固化后的水凝膠強度越強；每種細胞的最適取代度和最適強度均有所不同，建議您先用三個型號的水凝膠分別做一下預實驗，篩選最適合的型號、濃度及固化條件。

②在所有型號GelMA的表面接種細胞效果都很好；對于細胞混GelMA里做三維培養的型號選擇上，EFL常用型號及使用參數推薦如下：5%GM30（w/v），EFL-LS-1601便攜式固化光源光照30-60s，5%GM60（w/v），EFL-LS-1601便攜式固化光源光照15-22s。

③GM30、GM60和GM90均可應用于擠出式打印，均可復合其他材料一起做復合水凝膠擠出打印，可按需要打印的支架強度進行取代度的選擇，如需載細胞擠出打印需同時考慮細胞生長情況進行選擇。如做投影式光固化高精度打印，則優選GM90，成形效果和載細胞性能均非常好。PS:用戶如有高強度、精加工雙光子打印成形、低溫敏性等額外的GelMA材料性能需求，可單獨咨詢EFL技術人員，提供更優解決方案。

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Q3：GelMA怎么保存？我放在-4℃冰箱里，發現溶液固化了，是不是變性了呀？

答： 干態套裝：室溫，3個月；4℃，12個月；-20℃，18個月。無菌溶液：4°C避光，7天；-20℃避光，6個月。低取代度的GelMA溶液建議現配現用，多次反復凍溶無法保證固化品質。GelMA溶液具有溫敏性，低溫形成可逆的物理凝膠，室溫或冰箱冷藏避光保存時凝膠化屬于正?，F象，加熱即可恢復溶液狀態。

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Q4：GelMA溶解后是有點稠的液體，能過濾么？過濾損耗大嗎？高濃度過濾會不會很費勁??？有沒有其他的滅菌方式??？能121℃高溫高壓滅菌嗎？

答：可以過濾，可用0.22微米無菌過濾頭過濾除菌。過濾損耗與濃度成正比，同一型號GelMA溶液過濾，濃度越高損耗越多。常用的5% (w/v)濃度過濾損耗率＜5%，10% (w/v)濃度過濾損耗率＜10%。使用濃度≤10%（w/v）時，優先選0.22um過濾除菌方式最實用；濃度＞10% (w/v)時，高濃度液體較粘稠不易過濾，損耗大，可選擇巴氏滅菌，或直接選購15%（w/v）的無菌GelMA溶液成品（貨號：EFL-S-GM-30/60/90）。GelMA屬于聚多肽類材料，不可以121℃高溫高壓滅菌，容易破壞分子結構，導致無法固化。

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Q5：哪種型號的GelMA適合用于動物實驗？

答：各型號都可應用于動物實驗，具體選用的型號和濃度要根據實驗需求來選擇。需要材料緩慢降解則選用高濃度高取代度，對應楊氏模量較高的GelMA型號，反之相反；如果是載細胞實驗要同時考慮所需細胞效果的條件。GelMA水凝膠已被廣泛應用于各類組織修復與再生（骨修復、軟骨修復、神經再生、心肌修復等）、創面敷料、各類藥物與生長因子的負載與控釋等生物醫藥研究領域?？赏ㄟ^調節水凝膠的濃度和固化條件來模擬不同生物組織的機械強度，EFL常用型號GelMA的楊氏模量范圍參考值如下表所示。

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Q6：用GelMA負載外泌體或者ECM做細胞培養可以嗎？能固化嗎？有推薦的型號嗎？

答：可以的。EFL有很多客戶做相關研究，調整好添加物與GelMA的比例固化即可，具體型號要看您對強度的需求以及細胞的特性。GM30、GM60和GM90均有客戶使用，您可以先做預實驗找出適合自己細胞的條件。

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Q7：將GelMA鋪在載玻片或者培養皿上，固化以后明膠就會粘在基底上，有什么方法可以避免明膠粘在基底，或者盡量減少粘附力？

答：可以使用EFL的防粘膜（貨號：EFL-GRF系列），防粘膜適用于各類常用水凝膠和樹脂的無損剝離。如果您是做細胞三維培養可嘗試EFL的三維培養定制的固化環套裝(貨號：EFL-SCR-3D系列)，可改善細胞在膠內的物質代謝，且便于后期表征操作。

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Q8：請問怎么從GeMA中提取細胞做WB和PCR呢？師兄說用胰酶沒用，分不下來。

答：您可使用EFL的GeMA裂解液(貨號：EFL-GM-LS-001）來降解GelMA提取細胞。GeMA裂解液可在0.5-2h內快速降解GelMA并能較好的保持細胞的完整性和活性。提取出的細胞可以繼續傳代培養，也可直接進行蛋白或RNA提取。

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Q9：為什么我3D打印的GelMA網格載細胞支架有一面細胞長的好，有一面長的差呢？不是應該整個支架都長的差不多嗎？

答：EFLers實踐經驗表明，支架放在板孔中培養，貼板底側沒有上表面長的好，支架在培養基中懸浮培養，則整個支架細胞生長無明顯差異。您可將打印好的載細胞支架置于EFL自主研發的固化環3D細胞培養輔具（貨號：EFL-SCR-3D系列）上培養，可使支架整個懸浮在培養基中，增強支架內細胞的物質代謝，改善您所遇到的問題。

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Q10：為什么我同一次實驗做出來的膠塊里面，有的膠塊細胞長的好，有的膠塊細胞長的不好??？

答：您好！這可能與您的固化操作有關。您在固化過程中，需保持固化條件一致，光強、光照距離和光照時間相同。推薦您使用EFL自主研發的便攜式固化光源（貨號：EFL-LS-1601-405），該光源對比傳統的手電筒光源，具有光強穩定，光照距離固定，光照時間可控等優點，可以很好的消除樣本間制作的差異性。

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Q11：您好，我用GelMA打印了好幾種模型結構，但材料是透明的，實物圖怎么拍都不好看，有什么好的拍照辦法么？

? ?答：可以使用不同顏色的染料對水凝膠進行染色,使水凝膠結構更具辨識度。EFL已推出防擴散水凝膠染料（貨號：EFL-DYE-ND），有紅、綠、藍、黃、紫五種顏色可供選擇，有良好的防擴散能力，可視化呈現不同的水凝膠形態，可應用于自愈合水凝膠、懸浮打印水凝膠、可注射水凝膠、微流道水凝膠灌流等的著色觀察。

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Q12：您好，我想在打印好的支架表面包裹一層負載細胞的GelMA水凝膠，然后做免疫熒光染色，怎么才能拍出來細胞在支架上的分布呢？我的支架沒有熒光，拍不出來結構。

答：可以選擇直接用熒光GelMA（貨號：EFL-GM-RF/GF/BF系列）包裹培養細胞，或者用烯類偶聯熒光染料（貨號：EFL-DYE-UF-ENE系列）給普通GelMA標記上熒光，一起包裹培養細胞。選擇和您做免疫熒光顏色不沖突的熒光即可，利用GelMA發出的熒光勾勒出您打印的支架結構即可。