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        常見問題

        / Common Problem

        問:1g GelMA材料可以配多少溶液?

        答:EFL推薦使用的工作液濃度范圍為5%-30%(w/v),1g可以配3.3-20mL工作溶液;用戶常用濃度范圍為5%-10%(w/v),1g可以配10-20mL工作溶液;附贈LAP送引發劑,無需再單獨購買。

        問:GelMA的取代度有哪些型號?在GelMA表面接種細胞和把細胞混到GelMA里做三維培養,分別應該選什么型號的GelMA?要是做3D打印,又應該選什么型號呢?

        答:①EFL目前有氨基取代度為30%、60%和90%三種常用固定型號的GelMA,均有現貨。GM30、GM60和GM90均可應用于細胞培養,同等條件下,取代度越高,固化后的水凝膠強度越強;每種細胞的最適取代度和最適強度均有所不同,建議您先用三個型號的水凝膠分別做一下預實驗,篩選最適合的型號、濃度及固化條件。 ②在所有型號GelMA的表面接種細胞效果都很好;對于細胞混GelMA里做三維培養的型號選擇上,EFL常用型號及使用參數推薦如下:5%GM30(w/v),EFL-LS-1601便攜式固化光源光照30-60s,5%GM60(w/v),EFL-LS-1601便攜式固化光源光照15-22s。

        問:GelMA怎么保存?我放在-4℃冰箱里,發現溶液固化了,是不是變性了呀?

        答:干態套裝:室溫,3個月;4℃,12個月;-20℃,18個月。無菌溶液:4°C避光,7天;-20℃避光,6個月。低取代度的GelMA溶液建議現配現用,多次反復凍溶無法保證固化品質。GelMA溶液具有溫敏性,低溫形成可逆的物理凝膠,室溫或冰箱冷藏避光保存時凝膠化屬于正?,F象,加熱即可恢復溶液狀態。

        問:GelMA溶解后是有點稠的液體,能過濾么?過濾損耗大嗎?高濃度過濾會不會很費勁???有沒有其他的滅菌方式???能121℃高溫高壓滅菌嗎?

        答:可以過濾,可用0.22微米無菌過濾頭過濾除菌。過濾損耗與濃度成正比,同一型號GelMA溶液過濾,濃度越高損耗越多。常用的5% (w/v)濃度過濾損耗率<5%,10% (w/v)濃度過濾損耗率<10%。使用濃度≤10%(w/v)時,優先選0.22um過濾除菌方式最實用;濃度>10% (w/v)時,高濃度液體較粘稠不易過濾,損耗大,可選擇巴氏滅菌,或直接選購15%(w/v)的無菌GelMA溶液成品(貨號:EFL-S-GM-30/60/90)。GelMA屬于聚多肽類材料,不可以121℃高溫高壓滅菌,容易破壞分子結構,導致無法固化。

        問:哪種型號的GelMA適合用于動物實驗?

        答:各型號都可應用于動物實驗,具體選用的型號和濃度要根據實驗需求來選擇。需要材料緩慢降解則選用高濃度高取代度,對應楊氏模量較高的GelMA型號,反之相反;如果是載細胞實驗要同時考慮所需細胞效果的條件。GelMA水凝膠已被廣泛應用于各類組織修復與再生(骨修復、軟骨修復、神經再生、心肌修復等)、創面敷料、各類藥物與生長因子的負載與控釋等生物醫藥研究領域??赏ㄟ^調節水凝膠的濃度和固化條件來模擬不同生物組織的機械強度,EFL常用型號GelMA的楊氏模量范圍參考值如下表所示。

        問:用GelMA負載外泌體或者ECM做細胞培養可以嗎?能固化嗎?有推薦的型號嗎?

        答:可以的。EFL有很多客戶做相關研究,調整好添加物與GelMA的比例固化即可,具體型號要看您對強度的需求以及細胞的特性。GM30、GM60和GM90均有客戶使用,您可以先做預實驗找出適合自己細胞的條件。

        問:將GelMA鋪在載玻片或者培養皿上,固化以后明膠就會粘在基底上,有什么方法可以避免明膠粘在基底,或者盡量減少粘附力?

        答:可以使用EFL的防粘膜(貨號:EFL-GRF系列),防粘膜適用于各類常用水凝膠和樹脂的無損剝離。如果您是做細胞三維培養可嘗試EFL的三維培養定制的固化環套裝(貨號:EFL-SCR-3D系列),可改善細胞在膠內的物質代謝,且便于后期表征操作。

        問:請問怎么從GeMA中提取細胞做WB和PCR呢?師兄說用胰酶沒用,分不下來。

        答:您可使用EFL的GeMA裂解液(貨號:EFL-GM-LS-001)來降解GelMA提取細胞。GeMA裂解液可在0.5-2h內快速降解GelMA并能較好的保持細胞的完整性和活性。提取出的細胞可以繼續傳代培養,也可直接進行蛋白或RNA提取。

        問:為什么我3D打印的GelMA網格載細胞支架有一面細胞長的好,有一面長的差呢?不是應該整個支架都長的差不多嗎?

        答:EFLers實踐經驗表明,支架放在板孔中培養,貼板底側沒有上表面長的好,支架在培養基中懸浮培養,則整個支架細胞生長無明顯差異。您可將打印好的載細胞支架置于EFL自主研發的固化環3D細胞培養輔具(貨號:EFL-SCR-3D系列)上培養,可使支架整個懸浮在培養基中,增強支架內細胞的物質代謝,改善您所遇到的問題。

        問:為什么我同一次實驗做出來的膠塊里面,有的膠塊細胞長的好,有的膠塊細胞長的不好???

        答:您好!這可能與您的固化操作有關。您在固化過程中,需保持固化條件一致,光強、光照距離和光照時間相同。推薦您使用EFL自主研發的便攜式固化光源(貨號:EFL-LS-1601-405),該光源對比傳統的手電筒光源,具有光強穩定,光照距離固定,光照時間可控等優點,可以很好的消除樣本間制作的差異性。

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